Laboratorio de Reproducción Asistida

Técnicas de Laboratorio

  • Espermograma completo
  • Evaluación de morfología espermática con criterio de Kruger
  • Recuperación y capacitación espermática (swim up-Percoll)
  • Test de sobrevida espermática
  • Estudio de compatibilidad Moco semen (Test pos coital o Test de Sims Hunner)
  • Estudio de ADN espermático

Preguntas Frecuentes

¿Qué es la fragmentación del ADN espermático?

La fragmentación del ADN espermático, se refiere a roturas o lesiones en el material genético del espermatozoide.

¿Por qué es importante conocer el grado de fragmentación del ADN espermático?

Es importante ya que a mayor número de lesiones, menor será la integridad del material genético y, por lo tanto, menor la probabilidad de que se produzca un embarazo a término.

¿Pueden ser reparadas estas lesiones del ADN?

En algunos casos el ovocito puede reparar el daño del ADN del espermatozoide que lo ha fecundado.
Esto va a depender de varios factores:

  • El tipo de lesión del ADN.
  • El porcentaje de ADN del espermatozoide afectado.
  • La calidad del ovocito. Este parámetro está generalmente ligado a la edad de la paciente.
¿Existe algún tratamiento que mejore los niveles de fragmentación del ADN espermático?

Se ha encontrado que el tratamiento con antioxidantes puede reducir significativamente los niveles de fragmentación de ADN, pero existe la posibilidad de que algunos pacientes no respondan al tratamiento. Esta diferencia en la respuesta al tratamiento se debe principalmente a las distintas causas que puedan provocar dicho daño: cuando el daño de ADN es inducido por factores tóxicos o altas temperaturas que activan caspasas y endonucleasas espermáticas es muy difícil modificar los niveles de fragmentación. En estos casos la práctica recomendada sería un procedimiento de reproducción asistida en donde se pueda diferenciar a los espermatozoides con menor fragmentación (PICSI o IMSI), o en casos extremos, el uso de espermatozoides procedentes de testículo, ya que se ha observado que su grado de fragmentación suele ser significativamente menor.

¿Puede variar el porcentaje de ADN fragmentado en espermatozoides de distintas muestras de un mismo individuo?

El porcentaje de espermatozoides con ADN fragmentado puede ser el mismo en los distintos ciclos de espermatogenesis del individuo, pero también puede variar en consecuencia de factores exógenos (por ejemplo tras un episodio de gripe o fiebre alta).

¿Se puede con un espermograma simple detectar fragmentación de ADN espermático?

No se puede. El espermograma valora otros parámetros de la muestra de semen como la concentración, motilidad y morfología de los espermatozoides, pero no tiene en cuenta la integridad del material genético.

¿La criopreservación de semen aumenta el daño de fragmentación de ADN en los espermatozoides?

La congelación de las muestras en nitrógeno líquido no modifica la fragmentación de ADN de los espermatozoides, por lo cual se puede realizar el test sobre muestras congeladas que después se pueden emplear en inseminación o RA.

¿Cuáles son las causas que provocan que se dañe el ADN del espermatozoide?

Las causas son variadas y se las puede distinguir en factores internos y factores externos al individuo:

Factores internos:
Selección ineficiente: La producción de espermatozoides se localiza en los túbulos seminíferos (testículos) y en algunos casos los espermatozoides y las células que les dan origen, sufren alteraciones de tipo genético que resultan en roturas del ADN. Estos espermatozoides dañados son generalmente seleccionados y eliminados, pero si el mecanismo de selección falla aparecen espermatozoides con el ADN fragmentado en el eyaculado.

Maduración incorrecta: Los espermatozoides sufren un proceso de maduración en el epidídimo. Este proceso de maduración conlleva al empaquetamiento de la cromatina nuclear y la adquisición de la motilidad espermática. Si este proceso no se lleva a cabo correctamente se pueden producir lesiones en el ADN espermático.

Factores externos:
– Daño inducido por radio/quimioterapia.
– Varicocele.
– Episodio de fiebre alta.
– Exposición a elevadas temperaturas.
– Enfermedad inflamatoria aguda y crónica.
– El estrés oxidativo post-testicular: Durante el transporte de los espermatozoides a través del epidídimo se puede producir fragmentación del ADN espermático. Uno de los mecanismos principales es el relacionado con la producción de radicales libres, ya sea por espermatozoides inmaduros o por las células epiteliales del epidídimo, que dañan directamente el material genético del espermatozoide.

¿Cómo se detecta la fragmentación en el ADN espermático?

Existen varios métodos para medir los niveles de fragmentación. En nuestro Centro utilizamos el estudio de SCD (Sperm Chromatin Dispertion), que es un test con gran proyección clínica que ha sido ampliamente evaluado y recomendado por líderes de opinión en estudios de fragmentación de ADN.

Utilizando este sistema se ha establecido que cuando el individuo presenta el 30% o más de los espermatozoides con ADN fragmentado, su probabilidad de conseguir un embarazo a término es menor al 1%, tanto en fecundación natural como mediante técnicas de Reproducción Asistida.

¿En qué casos está indicado el estudio de fragmentación del ADN espermático?

Este test se recomienda en los siguientes casos:

– Infertilidad idiopática (de causa desconocida)
– Fallos repetidos en técnicas de Reproducción Asistida.
– Casos donde se ha observado una mala calidad embrionaria.
– Pacientes que han sufrido abortos de repetición.
– Varicocele.
– Varones con edades superiores a los 45 años.
– Episodio febril en los últimos 3 meses.


Columnas de Anexinas

La técnica está dirigida a aquellos pacientes varones que presentan niveles elevados de fragmentación de su ADN espermático. “Estas son rupturas o lesiones en el material genético del espermatozoide. Cuanto más comprometida está la integridad del material genético, más pobre será el pronóstico de lograr un embarazo a término.”

Al separar los espermatozoides sanos de los que presentan daño genético, es posible “convertir una muestra espermática patológica en una muestra con los mismos valores de fragmentación de un paciente fértil. Esto permite aumentar las posibilidades de fertilización y de que el embrión que se forma tenga mayor potencial de generar un embarazo a término”.

La separación magnética por columnas de anexina V consiste en colocar una proteína llamada anexina V en la muestra espermática. “Sabemos que la anexina tiene afinidad por una proteína presente en las membranas de las células del esperma afectado. Utilizamos entonces una anexina que está acoplada a una pelotita de metal de 50 nanómetros.”

Así, la anexina se adhiere a los espermatozoides con ADN fragmentado. Entonces, se hace pasar la muestra espermática por un sistema de columnas con magnetos, a los que se adhieren los espermatozoides con anexina. El resultado es una muestra espermática con un nivel de fragmentación de ADN normal, que puede ser empleada luego para un ICSI.

“La implantación del embrión frecuentemente fracasa por daño del ADN espermático. Con lo cual, realizar un ICSI [Inyección Citoplasmática de Espermatozoides] con espermatozoides seleccionados mediante columnas de anexina podría revertir la infertilidad en estos pacientes. volver al listado

ICSI
Cuando la muestra espermática es muy pobre y se sospecha que es poco posible que los espermatozoides puedan fertilizar solos, se utiliza la técnica de ICSI (Inyección Espermática Intracitoplasmática) en donde se inyecta un espermatozoide en cada ovocito. volver al listado


PICSI

ICSI con preselección. Se trata de otra técnica utilizada para seleccionar espermatozoides. Siendo el Hialuronato el mayor componente del cumulus oophorus, se demostrado que los espermatozoides que se unen a él son más maduros y tienen un menor índice de fragmentación de ADN y de alteraciones cromosómicas (aneuploidías) que los que no se unen. volver al listado


Hatching Asistido

Los embriones están rodeados de una capa denominada zona pelúcida de la cual deben desprenderse para poder implantarse. Una vez que el embrión está en la cavidad uterina va adelgazando su zona pelúcida gradualmente, ayudado por sustancias producidas por él mismo. Hay evidencias que algunos embriones pueden carecer de la habilidad para adelgazar y desprenderse de la zona pelúcida. Por esta razón se diseñó un procedimiento denominado eclosión asistida en la cual se le efectúa al embrión una pequeña abertura en la zona pelúcida unos minutos antes de transferirlo a fin de facilitarle el desprendimiento y consecuente implantación. Esta técnica suele efectuarse en embriones de mujeres de más de 37 años, en embriones con zona pelúcida engrosada y en pacientes con fallas previas de FIV en las que se transfirieron embriones aparentemente de buena calidad y no implantaron. volver al listado


Co cultivo de células endometriales

La técnica de co-cultivo de embriones con células endometriales se utiliza para mejorar el medio de cultivo en el que se desarrollan los embriones. Actualmente se recomienda en parejas que hayan tenido dos o más intentos fallidos de FIV o ICSI, aquellas que hayan tenido embriones de mala calidad, o parejas que hayan tenido abortos precoces sin causa aparente.

Es una técnica que estamos desarrollando hace algo más de dos años, y consiste en utilizar las células de endometrio como una capa sobre la cual se colocan los embriones que se han fertilizado por alguna técnica de fertilización (FIV- ICSI- Ovodonación), desde la fertilización hasta la transferencia en el útero de la mujer. Las células endometriales se obtienen mediante una biopsia de endometrio, se cultivan en el laboratorio para aumentar su cantidad y luego de una semana aproximadamente se congelan.
Serán utilizadas durante el ciclo de tratamiento de alta complejidad.

El mecanismo por el cual estos co-cultivos son beneficiosos no es todavía totalmente claro, parecería ser el medio más natural y fisiólogico y probablemente las células endometriales producen factores de crecimiento que podrían favorecer el mejor desarrollo embrionario y así mejorar las tasas de embarazo. volver al listado